Topmusicanswers
Bunun yerine, PCR koşullarının optimize edilmesi gerekecektir; PCR koşullarını ayarlarken aşağıdakileri göz önünde bulundurun:
- Şablon miktarını azaltın.
- Tavlama sıcaklığını artırın.
- Touchdown PCR'yi kullan.
- PCR döngülerinin sayısını azaltın.
- Primerleri yeniden tasarlayın.
- İç içe primerler kullanın.
- Ürünü yeniden büyütün.
- PCR'm neden çalışmıyor??
- PCR koşullarını nasıl optimize edersiniz?
- PCR'de bulaşmaya ne sebep olur??
- PCR'nin kontamine olup olmadığını nasıl anlarsınız??
PCR'm neden çalışmıyor??
PCR reaksiyonunun sadece bir bileşenini unutmak, bu ister DNA polimeraz olsun, ister primerler veya hatta şablon DNA olsun, başarısız bir reaksiyonla sonuçlanacaktır. En basit çözüm reaksiyonu tekrarlamaktır. ... Bundan sonra hala bir PCR ürünü yoksa, reaksiyonunuzu engelleyen başka bir şey olma ihtimali vardır.
PCR koşullarını nasıl optimize edersiniz?
PCR koşulları
- Daha yüksek denatürasyon sıcaklıkları kullanın (e.G., Şablonun tam denatürasyonunu sağlamak için 94°C veya 95°C'nin aksine 98°C).
- GC açısından zengin şablonlar için tavlama sürelerini olabildiğince kısa tutun.
- Daha yüksek T'ye sahip primerler kullanınm (>68°C), çünkü tavlama daha yüksek bir sıcaklıkta gerçekleşebilir.
PCR'de bulaşmaya ne sebep olur??
DNA kontaminasyonu, DNA örneğinde RNA, PCR reaksiyonunda yüksek DNA konsantrasyonu bulaşmaya neden olabilir. ... Şablon DNA'nın yüksek konsantrasyonu nedeniyle genellikle bitkilerde meydana gelen DNA bulaşması.
PCR'nin kontamine olup olmadığını nasıl anlarsınız??
Solüsyonu kontaminasyon açısından kontrol etmek için, kontamine olmadığı bilinen yeni reaktifler kullanarak negatif kontrol reaksiyonları oluşturun ve her reaksiyona şüpheli solüsyonlardan birini ekleyin. Bu reaksiyonun, kontaminasyonun göstergesi olan amplifiye ürünleri göstermesi, eklenen solüsyonun kontamine olduğunun kanıtıdır.
